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基于数字PCR的甲状腺乳头状癌BRAF V600E突变检测新方法
点击次数:1747 发布日期:2019-10-12  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

近日,华山医院关明教授团队在《Clinica Chimica Acta》杂志发表题为”Detection of BRAF V600E mutation in fine-needle aspiration fluid of papillary thyroid carcinoma by droplet digital PCR”的研究论文。在关明教授的指导下,中心实验室的许笑助理研究员首次通过微滴式数字PCR(ddPCR)以甲状腺乳头状癌(PTC)患者的细针穿刺(FNA)样本为检材,建立了精准可靠、灵敏度高的BRAF V600E突变检测方法。

PTC是最常见的内分泌肿瘤,占甲状腺癌的85%。目前,超声引导下的FNA样本病理检查是诊断PTC的金标准。但是,高达1/3的病例通过常规病理学检查进行确诊时仍然面临巨大的挑战,主要归结于FNA样本中获得的肿瘤细胞数量少且细胞质量及单一性方面差异较大。随着科学技术的发展,通过分子生物学方法检测核酸物质的遗传学改变成功克服了临床PTC诊断的难点。目前,常见的检测方法主要有免疫组化、ARMS法和测序法,但是这些检测技术受灵敏度的限制无法有效实现FNA样本中少量肿瘤细胞的检测,因此需要建立一种更为精准和灵敏的方法用于PTC的早期诊断。

微滴式数字PCR是一种新型的核酸定量技术,可以实现对初始模板的精准定量,与其它临床检测方法相比灵敏度更高、特异性更好。此外,在过去几十年BRAF V600E突变已确定是最常见的与PTC的发生、发展及临床病理特征密切相关的分子标志物。因此,该研究基于ddPCR首次对FNA样本的BRAF V600E突变检测,同时与常规ARMS方法进行比对,用于PTC临床样本的检测。研究根据NCCN甲状腺癌临床实践指南,收集并诊断了146例PTC患者、2例甲状腺滤泡状癌(FTC)和12例甲状腺良性结节病例。采集FNA样本,分别采用ddPCR和ARMS检测其BRAFV600E突变。

研究结果显示,ddPCR在检测中具有良好的重复性(CV0.1%=22.82%,CV10%=4.85%)和极高的检测灵敏度(最低1-2 copies/μL,0.01%)。在全部160例病例中,使用ddPCR共测得128例BRAF V600E突变,其中4例为ARMS阴性病例,3例为良性结节病例。由此可知,在FNA标本的BRAF V600E突变检测中,ddPCR的敏感度和准确性表现优异。在一些临床样本的检测应用中ddPCR优于金标准的病理检测及传统的ARMS方法,详见图1。综上所述,基于ddPCR的检测方法能有效提高检出率、避免误检、漏检,适用于PTC的早期临床诊断。
 


A. H&E staining of 2 FNA samples revealed tumor cells in Sample 01 but not Sample 02.

B. ARMS detected BRAF V600E mutation in Sample02 but not Sample 01.

C. ddPCR detected BRAF V600E mutation in both samples.

图1.临床样本的病理学、ARMS及ddPCR检测结果

该论文的合作方为交通大学医学院附属仁济医院,并列第一作者为来自仁济医院的马硝惟,并列通讯作者为仁济医院检验科李敏主任。本课题得到国家自然科学基金、上海市卫生局及上海市市科委等的经费资助。

论文链接:

https://doi.org/10.1016/j.cca.2019.01.017

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